◆◇研究心得◆◇ 茶蠶的性費洛蒙研究 動物研究所研究員周延鑫 主席羅副院長,李院長,各位女士,各位先生,大家早安,今天 是本院第一任院長,蔡元培先生的128歲誕辰,首先我要感謝李院長 給我這個機會,讓我來講我們近來的一些研究結果,這些研究今天 來談,我想也是符合蔡先生的理念的。大家都知道,蔡先生是一位 教育學家,因為他曾說:「同氣相求,同聲相應,十年樹木,百年 樹人。」同時他也是一位偉大的哲學家,因為他也曾說過:「科學 是一門如何理解宇宙奧祕的自然哲學。」所以他在民國17年時創辦 了中央研究院,其中就包括了數理、人文及生物三大部門。我們的 研究是屬於動物方面的一個小小問題,今分數段說明如後: 一、前言 生物要能在地球上成功的生存,認識周圍環境的組成,並盡可能 的去利用一些環境中特殊的物理、化學及生物的因子是非常重要的 事情。例如我們人類就常借重五種感覺,即視、聽、嗅、味及觸覺 來認識我們的週遭環境。可是在比較低等的動物中,如昆蟲類,牠 們的視、聽、觸覺都不甚發達,可是牠們仍能在此地球上生生不息 ,牠們又是如何和牠們的環境交換消息的呢?這就不得不談談牠們 特有的靈敏嗅覺與味覺,也就是我們一般所謂的化學感覺了。 談到靈敏的嗅覺,我們又得從可以產生嗅覺的微量化學物質─性 費洛蒙開始談了,性費洛蒙是什麼?在定義上,它就是雌蛾在交配 時期所釋放的一種外分泌物質,雌蛾用它來引誘雄蛾不遠千里飛來 尋找雌性交配,以便繁殖後代。 研究昆蟲的人都知道,性費洛蒙第一個鑑定成功的科學家是德國 人卜提南氏,當時他用的材料是家蠶Bombyx mori(L.);第二個用 野蠶B. mandarina M.做性費洛蒙試驗成功的則是日本人。他們也發 現這兩種蠶蛾都是雌蛾利用尾端分泌主要的性費洛蒙(E,Z) -10,12-十六碳二烯醇來引誘雄蛾交尾。可是在臺灣也有屬於蠶蛾科 (Bombycidae)的第三種茶蠶Andraca bipunctata W.,牠們是不是 也分泌性費洛蒙?牠的性費洛蒙又是什麼物質?這是一個有趣的研 究課題,現將我們解決這個問題的方法與成果報導於後,有興趣做 研究的同仁一定也可以從這裡發現一些參考價值的。 二、尋「糞」見蹤跡 茶蠶的幼蟲專門吃茶樹的葉子,所以是茶園的大害蟲之一,農民 都想將牠殺死;但是因為牠們的成蛾都隱藏在濃密的茶葉內,不易 被發現,如果要找牠們,有經驗的人,都是在地上先看見牠們幼蟲 所排放的糞便,再仔細地在附近茶樹上尋找,才能看見牠們的蹤跡 。 如果我們要研究牠,首先就是將這種茶蠶的幼蟲採回實驗室,放 在一個塑膠盒內,每天用新鮮茶葉餵牠,讓牠在室內生長,這樣牠 的化蛹羽化就很容易觀察。由此也可以知道這種蛾類和蠶蛾一樣, 牠的雌雄個體在外型不同,雄蛾的觸角比雌蛾大很多,而雌蛾腹部 要比雄蛾大很多,同時在雌蛾尾部有一個性費洛蒙腺體,而雄蛾沒 有。這個性費洛蒙腺體平常是隱藏在尾端的體內,唯有在雌蛾要交 配時,牠才會伸出來分泌性費洛蒙,引誘雄蛾來交尾。因為這種蛾 和蠶蛾太相似了,所以牠們一定也會有性費洛蒙,問題是,牠們的 性費洛蒙到底是什麼物質?在國際的文獻上還找不到。 三、從三組試驗獲得至寶 首先我請本所的賀孝雍小姐,先將發情的雌蛾尾部剪下來,廿隻 一組,分為三組。第一組的尾端放在正己烷內,然後用氣相色層分 析儀分析溶在正己烷內的化學成份是什麼?結果她發現其中有四個 獨立成份,每個成份都和蠶蛾已知的性費洛蒙不同,所以是一種新 的組成。 然後我們將第二組的尾端抽出物打入氣相色層質譜儀內,分別得 到四種化合物的分子量,它們分別是268、266、266及264共四種。 分子量268的物質經電腦查詢,認定它是飽和的十八碳醛,而266及 264 的物質應是比十八碳醛多一個雙鍵及兩個雙鍵的物質而已。 第三組的尾端抽出物使和化學物質DMDS(Dimethyldisulfide)產 生化學反應,由此反應衍生物的特性我們知道兩種分子量為266的物 質,一是E,11-十八碳烯醛,另一是E,14-十八碳烯醛;而分子量為 264的物質則為(E,E)-11,14-十八碳二烯醛。 因為已經知道茶蠶的性費洛蒙是由(E,E)-11,14-十八碳二烯醛 等四種化合物所組成,所以我們便請本院化學所的陶雨台博士,將 此等物質以有機化學的方法分別的在試驗室內將它們合成了。 四、性費洛蒙生合成測量 性費洛蒙本來是雌蛾用來引誘雄蛾交配的訊息物質,所以在雌蛾 不發情時,理論上牠不會分泌這種物質。在蠶蛾的研究中,我們已 經知道,性費洛蒙的合成與釋放,完全受腦(食道下神經球)內的 細胞分泌的一種神經胜鈦鏈(PBAN)來調控,這種胜鈦鏈依照文獻 是由33 個胺基酸所組成,所以在試驗室內很容易用蛋白質合成儀將 它合成。依照傳統的方法,我們在茶蠶雌蛾頭部與胸部處結紮,使 位於腹部末端的費洛蒙腺體無法與神經胜鈦鏈接觸,經過一段時間 後,再用氣相色層分析儀分析其性費洛蒙的含量,果然發現性費洛 蒙已不存在。如果再將這種結紮後的雌蛾腹部注射含有合成的神經 胜鈦鏈(5 pmol)後,經過一段時間讓它們作用,結果發現在性費 洛蒙腺體,上面所說的四種成份都已恢復合成了,而特別是第四種 成份(E,E)-11,14-十八碳二烯醛的量合成的最多,其比正常雌蛾 的含量(240ng)都要高出二倍之多,可見它是茶蠶的主要性費洛蒙 。 五、化學合成性費洛蒙之生物活性鑑定 有了有機化學合成的性費洛蒙純品,接下來的工作就是測量此等 物質的生物活性,生物活性又分為室內的嗅覺測量以及室外的田間 誘蟲試驗。嗅覺測量就是將合成的化合物配成不同的濃度,然後用 雄蛾的觸角去試,看看那一種化合物可以由最低濃度在觸角的感覺 器上產生最大的電壓變化。茶蠶的嗅覺測試結果可以得到電壓與費 洛蒙濃度的直線正反應,也就是說只有(E,E)-11,14-十八碳二烯 醛可以在 0.2微毫克的濃度下引起比空氣(對照組)增強一倍的電 位差變化,而其它三種化合物則無此能力。最後我們進行田間試驗 ,分別將0.1 毫克的四種化合物單獨或是以不同的比例混合放在野 外誘蟲,結果無論是在茶葉試驗所的茶園內,或是南港的茶園都只 有(E,E)-11,14- 十八碳二烯醛可以誘得雄蛾,所以這個研究結果 是正確的。 六、結語 最後我要說的是,研究科學的方法並不困難,正所謂:「有樣學 樣,無樣自己想。」,在這個茶蠶性費洛蒙的試驗裡,我們不但鑑 定了第三種蠶蛾科──茶蠶的性費洛蒙,同時還是第一次在科技文 獻內證明化合物(E,E)-11,14-十八碳二烯醛為昆蟲的性費洛蒙, 這個性費洛蒙以後不但可以大量在產茶國家如我國大陸、錫蘭與印 度等茶園誘蟲,協助茶農滅蟲,同時因為茶蠶的幼蟲食量比茶捲葉 蛾及茶姬捲葉蛾(目前在國內茶園已推廣防治的害蟲)的幼蟲大十 倍以上,所以更有應用防蟲的價值。另一方面這也是一個本土的生 物科研材料完全由國人在國內合作成功的例子,值得大家慶幸。最 後我用一個不成熟的詞來結束我今天的演講,那就是:「君且暫為 蛹,我亦棲天涯。姻緣原有秘,理賦有心人。明年春四月;攜手看 茶花。」謝謝大家,並敬祝大家身心健康快樂。 (講于元月11日蔡元培先生128歲誕辰紀念演講會)